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期刊名称:医药卫生
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出版单位:医药卫生杂志社

期刊总编:车东林

国内刊号:CN50-9219/R

国际刊号:ISSN1671-5675


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新闻详情

均相酶免疫法检尿醛固酮的方法学评价

发表时间:2024-04-01 21:29作者:董咏翠  冉金波  杨丽红来源:杭州迪安医学检验中心

摘要:目的 参考美国临床和实验室标准协会(CLSI)的EP文件规范,通过对苏州博源醛固酮检测试剂盒方法学分析性能验证,对该试剂盒能否达到医学实验室临床检验要求进行研究。方法 对尿醛固酮的精确度和准确度进行校正,对测量范围和参考区间进行验证,并与临床样本进行比对,以评估其性能指标和质量目标的一致性。结果:精密度验证:验证重复性、批间精密度和实验室内变异系数(CV),均小于试剂盒厂家提供的CV (10%) ,验证通过。正确度(企业校准品):允许偏倚均小于(±15.0%),验证通过;分析测量范围:浓度在1.00~40.00ng/mL,实际偏倚均在允许偏倚范围内(±15.0%),验证通过;临床样本比对:20例临床患者样本结果进行比较,数据相关性系数为0.999,验证通过;参考区间验证:健康人群的20例样本结果均在1.20~28.00(μg/24h)以内。结论:该检测方法其分析性能符合厂家声称的性能指标或公认的质量目标和要求,能够保证临床检验结果的真实性、准确性和可靠性,能够更好的满足和服务于临床。

关键词:均相酶免疫法;尿醛固酮;尿醛固酮

中图分类号:R446



Homogeneous Enzyme Immunoassay; Urinary Aldosterone; Performance Verification Dong Yongcui,   Ran Jinbo, Yang Lihong


Abstract:Objective: To verify the methodology analysis performance of Suzhou Boyuan aldosterone detection kit by referring to the EP document requirements of American Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), and to determine whether the kit can meet the requirements of clinical testing in medical laboratories. Methods: The precision, accuracy of urine aldosterone (enterprise calibration product), analysis and measurement range verification, reference interval verification, clinical sample comparison; The results are compared with the performance indicators claimed by the manufacturer or the accepted quality objectives. Results: Precision verification: The verification repeatability, inter-batch precision and coefficient of variation (CV) in laboratory were all smaller than the CV provided by the kit manufacturer (10%),and the verification was successful. Accuracy (enterprise calibration product) : the allowed bias is less than (±15.0%), the verification passed; Analysis and measurement range: the concentration was 1.00 ~ 40.00ng/mL, and the actual bias was within the allowable bias range (±15.0%), and the verification was passed. Comparison of clinical samples: The results of 20 clinical patients were compared, and the data correlation coefficient was 0.999, which was verified. Reference interval validation: The results of 20 healthy population samples were all within 1.20-28.00 (μg/24h). Conclusion: The analytical performance of the method is in line with the performance indicators claimed by the manufacturer or the recognized quality objectives and requirements, which can ensure the authenticity, accuracy and reliability of the clinical test results, and can better meet and serve the clinical.

Keywords: Homogeneous enzyme immunoassay; Urinary aldosterone; Urinary aldosterone



原发性醛固酮增多症(原醛症)是导致内分泌性高血压常见的原因之一[1]。它是由肾上腺皮质病变引起的,导致醛固酮过度分泌,同时抑制了肾素-血管紧张素系统。其主要特点是低血浆肾素活性和高血浆醛固酮浓度,伴有或不伴有低血钾的综合征[2]。目前临床广泛应用血醛固酮肾素活性比值(aldosterone-to-active renin ratio, ARR) 作为PA的筛查试验, 使PA的筛查率大大提高[3]。然而,醛固酮酮酸盐比值 (ARR) 受多种因素的影响,包括体位、昼夜节律、钠盐摄入和药物使用等[4-5]。因此,有关ARR的文献报道存在差异,切点值也有较大的差异[6]。相比之下,24小时尿醛固酮 (UALD) 具有一些优势,例如可以避免因体位变化、昼夜节律和检测时间引起的变异,相对更为稳定[7]。本研究基于均相酶免疫分析技术建立一种高效检测尿醛固酮(UALD)浓度的方法,并对该检测方法做出一致性评价。

1 材料与方法

样本来源,标本取自本中心患者及健康体检者尿液样本,因尿液杂质混浊,检测前3000转5分钟对样本进行离心;

1.1 仪器与试剂

仪器为Beckman AU5800全自动生化分析仪; 试剂为苏州博源医疗科技有限公司生产的醛固酮检测试剂盒(均相酶免疫法),试剂批号:220726,校准品批号:210830,质控品批号:210830。

1.2 方法

1.2.1精密度验证

根据美国临床与实验标准协会EP15-A所提出方法检测高、低两级水平质控品,每日4次,持续5天,并计算出该试剂各水平的重复及中间精密度(CV),将其与制造商公布的不精确密度比较。

1.2.2 正确度验证

在5天内,使用厂商提供的有溯源的企业标准品(两个浓度)进行2次重复测量,计算测定均值与赋值的百分偏倚。

1.2.3分析测量范围验证

参考WST 420- 2013《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》提供方案,留取试剂说明书所示分析测量范围上限和下限附近的高值和低值校准品,采用不同稀释比例(如6L、5L+1H、4L+2H、3L+3H、2L+4H,1L+5H,6H)进行按比例稀释,并对其重复检测2次。根据稀释度作为横轴,每个稀释度的测量均值作为纵轴进行线性回归图和差值图的绘制。要求回归方程符合 Y=bX+a 的形式,且相关系数的平方 r ≥ 0.975。不同浓度实际偏倚或差值需在允许的偏倚或差值范围内才能通过验证。

1.2.4临床样本比对:

选取20例临床患者标本,使用相同方法学分别在Biolis 30i(比较方法)与Beckman AU5800(实验方法)全自动生化分析仪测定UALD分析2组结果相关性,进行线性回归分析,计算相关系数r。

1.2.5 参考区间验证:

选取20例健康体检人员的尿液标本,检测UALD, 应不超过2例(10%)在验证区间外,说明验证通过。

1.3 统计学分析

统计学分析使用了Microsoft Excel 2003和SPSS26.0软件。数据分布情况采用了K-S方法进行分析,当P>0.05时,结果表明,数据呈正态分布。以Pearson相关法进行相关分析,以 P<0.05表示有显著性差异。线性分析采用了简单线性回归分析,以 P<0.05为5时,认为线性回归具有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度验证

与之配套的高低值质量控控品的重复性、批间精密度、实验室 CV及由制

造商提供的 CV结果。见表1精密度验证结果显示:低值和高值质控品的实验室内CV为4.86%和7.01%, 均小于试剂盒厂家提供的CV (10%) , 因此精密度验证通过,符合要求。

2.2 正确度验证

用厂商提供的有溯源的企业标准品(两个浓度4.99/18.22),每天重复测定2次,连续测定5天,计算测定均值与赋值的百分偏倚。2个水平定值企业标准


表1   精密度验证结果


低值
高值








均值
重复性精密度(Sr)
批间精密度(S1)
实验室内CV
厂家CV
均值
重复性精密度(Sr)
批间精密度(S1)
实验室内CV
厂家CV
14.82
0.43
0.72
4.86%
10%
29.58
1.4
2.07
7.01%
10%


表2   正确度验证结果


水平1
水平2


均值
(赋值)
偏倚
均值
(赋值)
偏倚
4.99(5.00)
-0.20%
18.22(20.00)
-8.91%


表3   分析测量范围验证结果


样本稀释比例
测定均值(ng/mL)
预期值(ng/mL)
相对偏倚(%)
6L
5.55 
5.55 
-0.81%
5L+1H
338.50 
341.27 
-0.81%
4L+2H
668.50 
672.56 
-0.60%
3L+3H
1024.00 
1003.86 
2.01%
2L+4H
1325.50 
1335.16 
-0.72%
1L+5H
1682.00 
1666.46 
0.93%
6H
1983.00 
1997.76 
-0.74%



品均值的相对偏倚均小于±15%(来源于试剂说明书),符合要求。

见表2。

2.3 分析测量范围验证:

浓度在1.00~40.00ng/mL区间内时,回归方程Y=6.6239X-4.7621,线性回归系数R2=0.9824,并且各个水平检测结果均值的相对偏移均小于±15%(来源于试剂说明书),符合要求。

见表3

图1   线性回归图


图2   差值图

2.4 临床样本比对

对于20例临床患者标本,我们使用了相同的方法在Biolis 30i(比较方法)和Beckman AU5800(实验方法)全自动生化分析仪上进行了UALD测定,并分析了两组结果之间的相关性。结果显示,相关系数R2为0.9973,表明两组结果之间具有高度一致性,符合要求。见表4


注:y = 1.0428x - 0.51   R2 = 0.9973

图3   临床样本法验证结果

2.5 参考区间验证

20名健康体检者的尿样本,根据24 h尿量计算后的结果,其值都在1.2-28.0 ug/24 h的标准范围内,符合要求。

3 讨论

醛固酮(ALD)是由肾上腺皮质球状带细胞合成和分泌的一种盐皮质激素[8]。目前临床实验室常用的尿醛固酮检测方法有放射免疫法(RIA)、化学发光免疫法(CLIA)及液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)等方法,准确性较好,但需特殊检测设备,价格昂贵,且检测成本高,耗时长[9]。

我们采用均相酶免疫法在全自动生化分析仪Beckman AU5800上验证尿醛固酮项目的性能, 并对其临床应用进行初步评价。该方法建立在均相液相中,样品中的自由基与葡萄糖苷六磷酸脱氢氢酶-醛固酮耦联剂之间的竞争关系,从而实现对血清中各种抗原的快速、准确、快速、准确的分析。在样品中有更多的自由醛固酮和更多的抗体与更多的抗原位点相竞争,则更多的抗原会被从样品中释放出来。在样品中,自由释放的醛固酮酶标记耦合物能将β-烟酰胺二核苷酸氧化成 NADH,其产生的 NADH与其在样品中的含量呈比例关系,根据吸光值在340 nm处的改变,可以直接测定其含量。本法参考CLSI文件对正确度、精密度、分析测量范围等重要指标进行了分析评价,体现了其具有良好的精密度、正确度、分析测量范围,达到了行业标准和厂家声明的要求。与相同试剂不同检测仪器对比结果显示,2组结果间呈现良好的线性关系[10]。

因此,本文利用均匀化的酶联免疫分析技术,对尿液中的醛固酮含量进行了测定。利用贝克曼AU5800型生化分析仪对样品进行分析,不需任何特别的前处理,也不需搭建一个专门的测试平台。该方法简单、快速,而且具有较好的重现性和准确性。因此,该方法适用于广泛的常规检测需求[11]。但我们的性能验证也存在一些缺陷,①关于参考区间,本文以20个体检人群为研究对象,以试剂说明书所述之参照区间为依据,进行验证,建议不同实验室各实验室建立自己的参考范围;②尿液pH值:在临床上,因为各种类型的疾病,都会出现体内的酸碱平衡失调,因此,我们还需深入研究,了解尿 pH的偏酸或者偏碱,会不会对实验的结果造成影响。这个问题值得我们深入研究[12]。

参考文献

朱杰,赵玲,王琳等.尿醛固酮与不同体位血浆肾素活性比值对原发性醛固酮增多症的筛查价值[J].解放军医学杂志,2018,43(07):569-573.

[2]樊静,张小云,冯绮玲等.尿醛固酮浓度在原发性醛固酮增多症中的筛查价值及质谱法和化学发光法检测的比较[J].中山大学学报(医学科学版),2020,41(04):563-571

[3]曾伟芳,沈玉婧,李华等.尿醛固酮及尿醛固酮与血浆肾素活性比在原发性醛固酮增多症诊断中的价值[J].中华高血压杂志,2014,22(01):63-68.

[4] Lamarre-Cliche M, de Champlain J, Lacourcière Y, et al. Effects of circadian rhythms, posture, and medication on reninaldosterone interrelations in essential hypertensives[ J]. Am J Hypertens, 2005, 18(1): 56-64. 

[5] Mulatero P, Rabbia F, Milan A, et al. Drug effects on aldosterone/ plasma renin activity ratioin primary aldosteronism[ J]. Hypertension, 2002, 40(6): 897-902.

[6] Funder JW, Carey RM, Mantero F, et al. The management of primary aldosteronism: casedetection, diagnosis, and treatment: an endocrine society clinical practice guideline[ J]. J Clin Endocrinol Metab, 2016, 101 (5): 1889-1916.

[7] Bernini G, Moretti A, Orlandini C, et al. Plasma and urine aldosterone to plasma renin activity ratio in the diagnosis of primary aldosteronism[ J]. J Hypertens, 2008, 26(5): 981-988.

[8]王鹂檐,魏玲,李治鹏.高醛固酮血症与代谢性疾病相关性的研究进展[J].浙江医学,2022,44(14):1565-1569.

[9] 周强,韦玉,潘颖等.均相酶法检测香草扁桃酸方法学评估及相关指标生物参考区间建立[J].国际检验医学杂志,2018,39(17):2122-2125+2130.

[10]韩钟,陈青松.甘胆酸均相酶免疫检测方法的建立及性能评估[J].中国卫生检验杂志,2019,29(19):2402-2404+2407.

[11]刘佳星,谷妍,刘杨等.血清总25-羟基维生素D胶乳免疫比浊法检测的方法学评价[J].标记免疫分析与临床,2021,28(12):2157-2161.

[12]张晓红,郭拥军,刘向祎.均相酶免疫法测定尿激素类项目的性能验证[J].标记免疫分析与临床,2018,25(10):1568-1573.

作者简介:董咏翠(1989—),女,本科,主管技师,主要从事临床生化免疫检验;冉金波,男,本科,主管技师,主要从事临床生化免疫检验;杨丽红,通讯作者,女,副主任医师,主要从事临床生化免疫检验。


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